等溫滴定量熱法是近年來發(fā)展起來的一種研究生物熱力學(xué)與生物動力學(xué)的重要方法，它通過高靈敏度、高自動化的微量量熱儀連續(xù)、準(zhǔn)確地監(jiān)測和記錄一個變化過程的量熱曲線，原位、在線和無損傷地同時提供熱力學(xué)和動力學(xué)信息。
在使用過程中會出現(xiàn)基線位置變化的問題，在這里整理了會影響基線位置的一些主要因素，
1.1 在安裝ITC儀器時，避免安裝在陽光直射的位置，以免導(dǎo)致長時間的陽光直射造成溫度沿滴定針傳導(dǎo)至樣品池，造成基線的漂移。
1.2 在安裝ITC儀器時，不要安裝空調(diào)口直吹的位置，以免導(dǎo)致長時間空調(diào)直吹造成溫度沿滴定針傳導(dǎo)至樣品池，造成基線的漂移。
1.3 人為操作的不小心，如滴定針不小心被碰彎了(經(jīng)常發(fā)生，當(dāng)?shù)味ㄡ樂旁赗est Position的時候，但是很多情況不容易發(fā)現(xiàn))，彎曲的滴定針有可能在滴定時持續(xù)摩擦樣品池側(cè)壁，造成樣品池溫度升高。
1.4 安裝的不到位或者固定的螺栓松了。在更換滴定針后滴定針有可能安裝不到位(露出Pipette底部的玻璃針管過長)或者長時間使用后固定滴定針的螺栓發(fā)生松動導(dǎo)致滴定針下沉，可能導(dǎo)致滴定時由于滴定針過長摩擦樣品池底部，造成樣品池溫度升高。
1.5 攪拌速率的影響。不同的攪拌速率會帶來不同的熱量釋放(攪拌速率越高，溫度越高，基線越低，反之亦然。)。一般在ITC實驗中，我們都設(shè)置的是恒定的攪拌速率，一般不會由于攪拌速率改變造成基線的變化。但在某些Pipette故障或者樣品粘度較高造成攪拌器轉(zhuǎn)動不均時，可能會導(dǎo)致樣品池?zé)崃康淖兓?/div>
1.6 樣品池中有氣泡。這個現(xiàn)象可能是最為常見的影響初始基線位置的原因了。樣品溫度、加樣技巧等都可能對基線有影響。當(dāng)樣品池中存在由于加樣或者樣品因溫度差脫氣造成的小氣泡時(由于水的比熱容要比空氣大，氣泡占據(jù)了水分子的位置導(dǎo)致樣品池中整體比熱容下降)，在給樣品池施加與參考池相同的功率時，樣品池的溫度會比參考池稍高，進(jìn)而使傳感器“誤認(rèn)為”樣品池更熱，從而減少給樣品池的功率，造成基線下降。在出色的操作技巧下，實際的初始基線一般和設(shè)定的Reference Power相差0.1ucal/s左右，當(dāng)然，一般情況下，±1 ucal/s的初始基線位置偏離一般是可以接受的。有一個需要注意的問題是，當(dāng)操作含有Detergent(如Triton X100, NP40等)的膜蛋白樣品時，建議小心的一次加樣完成，不建議通過吸打的方式排出氣泡，這樣可能會使問題更加嚴(yán)重
1.7 參考池中有氣泡。這個現(xiàn)象與上面描述的現(xiàn)象正好相反。
1.8 基線呈階梯狀下降(Step-wise decrease)。 當(dāng)?shù)味ㄡ樦袃H有空氣或者沒有*充滿樣品時，在滴定過程中，隨著樣品的注入，樣品池中由于空氣的不斷注入導(dǎo)致樣品池的比熱容一直在降低，導(dǎo)致基線呈階梯狀下降；另一種可能的原因連接滴定針的Fill Port Adaptor (FPA) 磨損造成的，這種情況需要更換新的FPA；在使用ITC研究酶促動力學(xué)的過程中，也會出現(xiàn)類似的現(xiàn)象，可以考慮反應(yīng)物之間是否存在可能的催化過程。
1.9 樣品池中未充滿。 當(dāng)樣品池沒有*充滿時，隨著滴定針中反應(yīng)物的逐漸注入，樣品池逐漸充滿，導(dǎo)致樣品池中的比熱容逐漸提高，導(dǎo)致基線呈階梯狀上升。因此，請加滿280 ul樣品并排出氣泡。
微信掃一掃
訪問手機端
