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【熱點(diǎn)應(yīng)用】Zetasizer精準(zhǔn)表征慢病毒載體 (LV) 顆粒粒徑及滴度

更新時(shí)間:2024-07-23       點(diǎn)擊次數(shù):807


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本文由馬爾文帕納科醫(yī)藥行業(yè)應(yīng)用專家供稿




本文摘要

本文通過介紹馬爾文帕納科納米粒度及電位儀Zetasizer Ultra用于慢病毒載體顆粒粒徑及載體滴度表征的實(shí)驗(yàn)設(shè)置及檢測結(jié)果。讓您快速實(shí)現(xiàn)慢病毒載體(LV)關(guān)鍵質(zhì)量屬性的評估。


慢病毒載體(Lentiviral vector, LV)是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng),可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達(dá)到持久性表達(dá)目的序列的效果??捎行У馗腥旧窠?jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞,從而達(dá)到良好的的基因治療效果。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞, 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,使用慢病毒載體,能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加,能夠比較方便快捷地實(shí)現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達(dá)。


所以,在體外實(shí)驗(yàn)及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究中慢病毒載體(LV)與腺病毒(Ad)和腺相關(guān)病毒(AAV)同為主流的病毒載體系統(tǒng)。其顆粒粒徑約為90-120nm。


在慢病毒載體(LV)的生產(chǎn)工藝中,有無團(tuán)聚體 (aggregate),以及載體滴度(titer)的高低是重點(diǎn)考察的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQAs)。Zetasizer Ultra納米粒度儀通過對LV顆粒的粒徑及載體滴度的表征,快速實(shí)現(xiàn)CQAs的測量。

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Zetasizer Ultra 納米粒度電位儀


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實(shí)驗(yàn)方法設(shè)定


使用Zetasizer Ultra-Red以及小體積石英比色皿(ZEN2112)進(jìn)行相應(yīng)的粒徑和滴度測定。樣品測試體積為20µL,LV折射率、吸收率分別設(shè)置為1.45和0.001。


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分析結(jié)果


通過多角度動(dòng)態(tài)光散射(multi-angle DLS, MADLS)技術(shù),我們對LV粒度大小及分布進(jìn)行表征(圖1) 。圖中有兩個(gè)粒徑分布峰,分別位于106.4以及430.6nm,這說明體系中除了LV單體,還有團(tuán)聚體產(chǎn)生。

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圖1 LV樣品的光強(qiáng)粒徑分布圖

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圖2 LV樣品的載體滴度


此外,除了基于MADLS技術(shù)得到的顆粒的準(zhǔn)確粒徑分布圖,我們還得到對應(yīng)尺寸的載體滴度信息(圖2)??梢钥吹絃V單體的顆粒濃度約1x1012個(gè)顆粒/mL,團(tuán)聚體顆粒濃度約為1x1010個(gè)顆粒/mL,僅為單體的1%。單體和聚集體濃度相差較大的情況下,Zetasizer仍可很好的區(qū)分單體和聚集體。


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